Достоинства и недостатки ПЦР-диагностики
21.04.09, посмотрело: 5 396
0
Мазок методом ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний обладает следующими преимуществами:
* Прямое определение возбудителей инфекционных заболеваний.
Многие традиционные методы лабораторной диагностики подразумевают выявление возбудителей заболевания по различным косвенным признакам. Например, ИФА-диагностика основана на обнаружении в крови пациента белков, являющихся продуктами распада инфекционных возбудителей, на основании чего врач может поставить тот или иной диагноз. Метод ПЦР-анализа дает прямое указание на присутствие в забранном у пациента материале специфического участка ДНК возбудителя болезни.
* Высокая специфичность ПЦР-диагностики.
В процессе проведения анализа в исследуемом материале выделяется фрагмент ДНК, специфичный, т.е. присущий только конкретному возбудителю - только определенной бактерии или вирусу. Данный участок ДНК уникален и не характерен ни для одной инфекции на земле.
* Высокая чувствительность ПЦР.
Обнаружение инфекции возможно даже в том случае, если в забранном у пациента материале содержится лишь одна клетка бактерии или вируса. По сравнению с другими иммунологическими и микробиологическими методами диагностики: чувствительность ПЦР-анализа - 10-100 клеток в пробе, другие методы - 103-105 клеток.
* Универсальность ПЦР-анализа.
Для ПЦР-исследования может применяться практически любые материалы, в том чиле недоступные для исследования другими методами: слизь, моча, кровь, сыворотка, мокрота, эякулят, соскоб эпителиальных клеток - поскольку инфекция может содержаться в любых биологических выделениях и тканях.
* Высокая скорость получения результата ПЦР-анализа.
Единый для всех метод обработки забранного на анализ у пациента материала, детекции продуктов реакции, автоматизированная ПЦР-амплификация позволяются провести полную ПЦР-диагностику за 4-5 часов. В тоже время, на культуральные методы исследования затрачивается гораздо больше времени - от нескольких дней до нескольких недель, поскольку необходимо выделение, а затем и выращивание возбудителя на культуре клеток.
* Возможность диагностики любого вида инфекции.
Высокая чувствительность метода ПЦР позволяет диагностировать инфекцию не только на острой стадии заболевания, но и хронические инфекции и даже наличие единичных бактерий или вирусов.
Мазок методом ПЦР позволяет выявить инфекции, которые невозможно обнаружить в мазке на флору: хламидиоз , уреаплазмоз , микоплазмоз , генитальный герпес.
Какими бы значительными достоинствами не обладал метод исследования, но и ПЦР-диагностика имеет некоторые ограничения. К недостаткам ПЦР-диагностики можно отнести:
* Возможность получения ложноположительного результата
ПЦР-анализ может показать положительный результат даже в том случае, если инфекция уже мертва, "убита" антибиотиками, но ее мертвые клетки все еще содержатся в тканях пациента. Как такое возможно? Очень просто. Например, инфекция живет в клетках эпителия (на слизистой половых органов или глаз). И ее полечили. Но для "обновления" клеток эпителия требуется время. Если материал будет забран врачом до срока полного обновления клеток, в материале могут содержаться мертвые клетки инфекции. Клетки, очевидно, содержат генетический материал - ДНК или РНК возбудителя, который и "ищет" ПЦР. ПЦР не отличает мертвые клетки от живых: она ищет ДНК, и "клонирует" их в огромных количествах. Результат такого анализа положительный. В действительности же он является ложноположительным.
Неспособность ПЦР "отличить" мертвую инфекцию от живой налагает определенные требования при использовании ПЦР и для контроля эффективности лечения. Основное правило, конечно же, дождаться полного выведения мертвых остатков инфекции из организма, что у среднего человека происходит в течение 4-8 недель. По истечении этого срока после приема последней таблетки антибиотика метод ПЦР можно и нужно использовать для контроля эффективности проведенного лечения.
На более ранних сроках контроль излеченности можно произвести только с помощью культурального метода, или посева: признаком неизлеченности могут служить только жизнеспособные размножающиеся микроорганизмы.
*
Нежелательно использовать ПЦР-анализ для диагностики гарднереллеза , так как гарднереллы - возбудители этого заболевания в небольшом количестве в норме живут во влагалище. ДНК этих бактерий же при использовании ПЦР будет раз за разом находиться. Гарднерелл не должно быть в мазке, и бактериоскопия в данном случае - достаточный метод для диагностики гарднерелллеза и контроля лечения.
* Изменчивость микроорганизмов
Любой микроб обладает способностью изменяться, причем на уровне ДНК. Наиболее яркий пример из этой области - это вирус гриппа. Переболев однажды, на вирус у человека вырабатываются антитела. Чисто теоретически, если мы переболели гриппом хоть один раз, то как и ветряной, второй раз мы болеть не должны. Но болеем мы практически каждый год. В чем причина? Вирус "мутирует", немного "изменяя" свой геном, и наша иммунная система, наши антитела уже "не узнают" старого гостя в новом обличии. Как ни прискорбно, приходится болеть гриппом заново…
При проектировании амплификатора (тестовой ПЦР-системы) используют специфичный для данного микроорганизма фрагмент ДНК, наименее подверженный изменениям. Он "выбирается" из так называемой высоко консервативной области ДНК. Но изменчивость микроорганизмов может приводить к тому, что некоторые генотипы или штаммы исследуемого возбудителя могут приобретать мутации в амплифицируемом (клонируемом) участке генома, и, таким образом, становиться неуловимыми данной тест-системой.
Таким образом, различные тест-системы - одна из причин, почему анализы, сделанные в разных лабораториях и в разных клиниках "одним и тем же" методом ПЦР могут показывать диаметрально противоположные результаты. Чтобы максимально избегать ошибок по вине мутаций, в настоящее время разработаны стандарты, регламентирующие объем испытаний (включая проверку на перекрестные реакции, а также тестирование известных штаммов определяемого возбудителя), которые должна выдержать тест-система, прежде чем она попадет на рынок и будет использована для диагностики вашего здоровья. Вот почему хорошие клиники и лаборатории используют последние поколения тест-систем.
* Прямое определение возбудителей инфекционных заболеваний.
Многие традиционные методы лабораторной диагностики подразумевают выявление возбудителей заболевания по различным косвенным признакам. Например, ИФА-диагностика основана на обнаружении в крови пациента белков, являющихся продуктами распада инфекционных возбудителей, на основании чего врач может поставить тот или иной диагноз. Метод ПЦР-анализа дает прямое указание на присутствие в забранном у пациента материале специфического участка ДНК возбудителя болезни.
* Высокая специфичность ПЦР-диагностики.
В процессе проведения анализа в исследуемом материале выделяется фрагмент ДНК, специфичный, т.е. присущий только конкретному возбудителю - только определенной бактерии или вирусу. Данный участок ДНК уникален и не характерен ни для одной инфекции на земле.
* Высокая чувствительность ПЦР.
Обнаружение инфекции возможно даже в том случае, если в забранном у пациента материале содержится лишь одна клетка бактерии или вируса. По сравнению с другими иммунологическими и микробиологическими методами диагностики: чувствительность ПЦР-анализа - 10-100 клеток в пробе, другие методы - 103-105 клеток.
* Универсальность ПЦР-анализа.
Для ПЦР-исследования может применяться практически любые материалы, в том чиле недоступные для исследования другими методами: слизь, моча, кровь, сыворотка, мокрота, эякулят, соскоб эпителиальных клеток - поскольку инфекция может содержаться в любых биологических выделениях и тканях.
* Высокая скорость получения результата ПЦР-анализа.
Единый для всех метод обработки забранного на анализ у пациента материала, детекции продуктов реакции, автоматизированная ПЦР-амплификация позволяются провести полную ПЦР-диагностику за 4-5 часов. В тоже время, на культуральные методы исследования затрачивается гораздо больше времени - от нескольких дней до нескольких недель, поскольку необходимо выделение, а затем и выращивание возбудителя на культуре клеток.
* Возможность диагностики любого вида инфекции.
Высокая чувствительность метода ПЦР позволяет диагностировать инфекцию не только на острой стадии заболевания, но и хронические инфекции и даже наличие единичных бактерий или вирусов.
Мазок методом ПЦР позволяет выявить инфекции, которые невозможно обнаружить в мазке на флору: хламидиоз , уреаплазмоз , микоплазмоз , генитальный герпес.
Какими бы значительными достоинствами не обладал метод исследования, но и ПЦР-диагностика имеет некоторые ограничения. К недостаткам ПЦР-диагностики можно отнести:
* Возможность получения ложноположительного результата
ПЦР-анализ может показать положительный результат даже в том случае, если инфекция уже мертва, "убита" антибиотиками, но ее мертвые клетки все еще содержатся в тканях пациента. Как такое возможно? Очень просто. Например, инфекция живет в клетках эпителия (на слизистой половых органов или глаз). И ее полечили. Но для "обновления" клеток эпителия требуется время. Если материал будет забран врачом до срока полного обновления клеток, в материале могут содержаться мертвые клетки инфекции. Клетки, очевидно, содержат генетический материал - ДНК или РНК возбудителя, который и "ищет" ПЦР. ПЦР не отличает мертвые клетки от живых: она ищет ДНК, и "клонирует" их в огромных количествах. Результат такого анализа положительный. В действительности же он является ложноположительным.
Неспособность ПЦР "отличить" мертвую инфекцию от живой налагает определенные требования при использовании ПЦР и для контроля эффективности лечения. Основное правило, конечно же, дождаться полного выведения мертвых остатков инфекции из организма, что у среднего человека происходит в течение 4-8 недель. По истечении этого срока после приема последней таблетки антибиотика метод ПЦР можно и нужно использовать для контроля эффективности проведенного лечения.
На более ранних сроках контроль излеченности можно произвести только с помощью культурального метода, или посева: признаком неизлеченности могут служить только жизнеспособные размножающиеся микроорганизмы.
*
Нежелательно использовать ПЦР-анализ для диагностики гарднереллеза , так как гарднереллы - возбудители этого заболевания в небольшом количестве в норме живут во влагалище. ДНК этих бактерий же при использовании ПЦР будет раз за разом находиться. Гарднерелл не должно быть в мазке, и бактериоскопия в данном случае - достаточный метод для диагностики гарднерелллеза и контроля лечения.
* Изменчивость микроорганизмов
Любой микроб обладает способностью изменяться, причем на уровне ДНК. Наиболее яркий пример из этой области - это вирус гриппа. Переболев однажды, на вирус у человека вырабатываются антитела. Чисто теоретически, если мы переболели гриппом хоть один раз, то как и ветряной, второй раз мы болеть не должны. Но болеем мы практически каждый год. В чем причина? Вирус "мутирует", немного "изменяя" свой геном, и наша иммунная система, наши антитела уже "не узнают" старого гостя в новом обличии. Как ни прискорбно, приходится болеть гриппом заново…
При проектировании амплификатора (тестовой ПЦР-системы) используют специфичный для данного микроорганизма фрагмент ДНК, наименее подверженный изменениям. Он "выбирается" из так называемой высоко консервативной области ДНК. Но изменчивость микроорганизмов может приводить к тому, что некоторые генотипы или штаммы исследуемого возбудителя могут приобретать мутации в амплифицируемом (клонируемом) участке генома, и, таким образом, становиться неуловимыми данной тест-системой.
Таким образом, различные тест-системы - одна из причин, почему анализы, сделанные в разных лабораториях и в разных клиниках "одним и тем же" методом ПЦР могут показывать диаметрально противоположные результаты. Чтобы максимально избегать ошибок по вине мутаций, в настоящее время разработаны стандарты, регламентирующие объем испытаний (включая проверку на перекрестные реакции, а также тестирование известных штаммов определяемого возбудителя), которые должна выдержать тест-система, прежде чем она попадет на рынок и будет использована для диагностики вашего здоровья. Вот почему хорошие клиники и лаборатории используют последние поколения тест-систем.
Если вы обнаружили ошибку на этой странице, выделите ее и нажмите Ctrl+Enter.
Ключевые слова: инфекции, диагностики, возбудителя, пациента, может, только, материале, могут, метод, Высокая, клеток, будет, мертвые, инфекция, время, исследования, можно, чувствительность, случае, заболевания
Категория: Анализ
|