Результаты гистологического исследования при диагностике опухоли кожи более информативны, чем данные цитологического исследования. Это наглядно продемонстрировано при диагностике метатипического рака кожи, занимающего промежуточное положение между базалиомой и плоскоклеточным раком кожи. Поданным Е.С. Снарской (1994), цитологическая картина в 75% случаев метатипического рака была идентична язвенной база-лиоме и лишь в 25% случаев дала возможность предположить метатипический рак. Гистологическое исследование необходимо проводить, даже если диагноз опухоли кожи кажется ясным.

С целью исключения злокачественной опухоли кожи оно должно проводиться при всех кожных узлах, а также целесообразно при опухолях, которые планируется подвергать лучевой терапии, после которой ткань опухоли становится непригодной для гистологического исследования. Гистологическое исследование дает возможность оценить, удалена ли опухоль в пределах здоровой кожи. В некоторых случаях необходимо проведение микроскопически контролируемой операции по серийным гистологическим срезам. Гистологическое исследование необходимо для определения тактики лечения больного и прогноза заболевания. Повторные биопсии с интервалом в несколько недель или месяцев могут быть использованы для мониторинга прогрессиро-вания лимфомы кожи или эффективности ее лечения. Гистологические препараты могут длительно храниться, пересматриваться в любое время, а также использоваться как документ.

Биопсия — метод получения ткани живого организма для морфологического исследования с диагностической целью. Она должна выполняться в условиях операционной или перевязочной с соблюдением всех правил асептики и антисептики. При этом для установления границы новообразования и видимо интактной ткани необходимо хорошее освещение операционного поля. Биопсия выполняется острым инструментом, рассекающим, а не разминающим кожу.

В дерматоонкологии используются эксцизионная биопсия, при которой иссекается вся опухоль, и инцизионная биопсия, при которой иссекается только часть новообразования (в центре, а не с периферии опухоли и с захватом интактной ткани). Материал для гистологического исследования также может быть получен путем кюретажа с использованием кюретки в форме кольца или хирургической ложки. Пункционная биопсия проводится специальным трубчатым ножом диаметром от 2 до 8 мм (чаще всего диаметром 4 мм). Он представляет собой полый цилиндр с режущим краем, который продвигают в толщу кожи, врашая большим и указательным пальцами. При этом получают столбик ткани, состоящий из эпидермиса, дермы и подкожной жировой клетчатки; основание столбика удаляют ножом. Кожный дефект закрывается швом или проводится гемостаз с помощью давящей повязки либо гемостатической губки. Биопсию путем срезания бритвой, скальпелем или ножницами применяют при узловой базалиоме и керато-мантоме. Разрез следует делать параллельно линиям кожного натяжения.

Разнообразие методов исследования материала (световая, электронная микроскопия, иммунофлюоресцентное окрашивание) делает биопсию кожи одним из самых простых и информативных методов диагностики опухолей кожи.

Для обычного гистологического исследования образец помещается в 10% раствор формалина. Стандартно фиксированные препараты не пригодны для гистохимических, цитохимических, иммуногистохимических и электронномикроскопических исследований.

Для электронной микроскопии используется буфер — глутаральдегид, а перед проведением иммунофлюоресцентного исследования образец опухоли должен быть немедленно заморожен или помещен в специальный транспортный буферный раствор.

Роль гистологического исследования при диагностике доброкачественных и злокачественных опухолей кожи подробно рассматривается в статье «Система кожных покровов». В то же время провести четкое разграничение между доброкачественными и злокачественными новообразованиями кожи может оказаться довольно сложно. При этом, исходя из того, что доброкачественная опухоль — это локализованная пролиферация клеток одного и того же типа с нормальной дифференцировкой и сохранением контроля за автономностью их роста, а злокачественная опухоль способна к ме-тастазированию в лимфатические узлы и внутренние органы, дать заключение о функциональных способностях опухолей по морфологической картине их маленького кусочка сложно. Особенные затруднения возникают в тех случаях, когда результаты гистологического исследования не коррелируют с клинической картиной опухоли. В этой связи может возникнуть проблема отличия доброкачественных опухолей от гамартом и рака in situ. Отличие доброкачественной опухоли от гамартомы основывается на том, что в гамартому включен более, чем один тип клеток. Что касается рака in situ, то этот диагноз устанавливается на основании признаков снижения дифференциров-ки и ядерной атипии клеток, локализованных лишь в пределах эпидермиса, т.е. отграниченных от других здоровых тканей.

Широкое распространение получают методы иммуноморфологического анализа биопсийного материала. С помощью антител к различным компонентам наружной мембраны или цитоплазмы клеток уточняются гистогенез опухоли, степень ее дифференцировки, начальные этапы инвазии. Используемыми с этой целью маркерами могут быть как вещества антигенной природы (белки, полипептиды, полисахариды), так и относительно простые соединения или даже химические группировки, не обладающие антигенными свойствами.

Для выявления клеток плоского эпителия протоков эккринных, апокринных и сальных желёз, а также гистогенетически связанных с ними опухолей кожи, используют антитела к антигенам эпителиальной мембраны (ЕМА), состоящим из гликопротеинов с высокой молекулярной массой.

Цитокератины, представляющие собой группу промежуточных волокон различного молекулярного веса, обнаруживаются в ороговевающем и неороговевающем эпителии. Для идентификации, например, кератинов высокого молекулярного веса, экспрессируемых многослойным плоским эпителием, используются панцитокератины САМ 5.2 и АР34. Ряд антител к кератину распознают уникальные эпи-топы придаточных структур кожи. С их помощью также можно определять гистогенез или направление дифференцировки многих опухолей пилосебоцейного комплекса и потовых желез.

Маркером меланоцитов является кислый протеин S100, антитела к нему реагируют с клетками Шванна, Лангерганса и эккринных потовых желез, а также с опухолями и гамартомами, развившимися из этих клеток. Его целесообразно использовать для отличия меланомы от других веретеноклеточных опухолей и для определения мелких отсевов меланомы, расположенных на расстоянии от первичной опухоли или в глубоких тканях кожи. Для идентификации доброкачественных и злокачественных меланоцитарных опухолей кожи также используют NK1-C3 и НМВ 45.

Для идентификации мягкотканных опухолей, наряду с антителами к цитокератинам также используют антитела к другим основным типам белков промежуточных волокон — виментину, десмину и белку нейрофиламентов. Виментин присутствует во многих клетках кожи (фибробластах, макрофагах, хондроцитах. эндотелиальных и лимфоидных клетках), поэтому применение его маркеров весьма ограничено. Напротив, десмин (полипептид с молекулярной массой 53 000) характерен для большинства миоцитов и поэтому не обнаруживается в саркомах, возникших без участия мышечной ткани. Нейрофиламенты, варьирующие по молекулярной массе от 68 000 до 200 000, идентифицируются в кожных опухолях из клеток Меркеля и карцино-идных опухолях. Менее целесообразно их использование при фиброгистиоцитарных опухолях. Хотя в некоторых истинных гистиоцитарных опухолях могут идентифицироваться антитела к о-антитрипсину, антихимотрип-сину и лизосомам. Сравнительно недавно открыто поликлональное антитело против фактора ХШа. Предполагается, что это клеточный маркер особой субпопуляции дермальных фиброгистиоцитарных клеток, называемых дермальными дендроцитами. Несмотря на то что фактор ХШа обнаруживается во многих клетках при различных типах мягкотканных опухолей, специфичным он является лишь для определенных опухолей, например для гистиоцитомы, богатой, в отличие от выбухающей дерматофибросаркомы, фактор ХIIIа-положительными клетками.

Опухоли кровеносных и лимфатических сосудов могут быть идентифицированы различными эндотелиальными маркерами. Антитела к антигену, связанному с фактором VIII используются для идентификации нормального и неопластического эндотелия, т.к. они не реагируют с тканью лимфатических капилляров, Для идентификации сосудистого эндотелия также используется Ulex Europaeus агглютинин 1. В нефиксированных замороженных срезах для различия между опухолями лимфатических и кровеносных сосудов используют EN4 и PAL-E. Лимфатические и мелкие кровеносные сосуды положительно окрашиваются на EN4. Напротив, на PAL-E могут положительно окрашиваться венулы, вены, капилляры, артериолы и артерии, а лимфатические сосуды — отрицательно,

С целью идентификации лимфом кожи и отличия их от кожных заболевании (укусов насекомых, лимфоцитомы и т.д.) используют панель лейкоцитарных маркеров; для иммуногистохимического выявления дифференцировочных антигенов мембран опухолевых клеток используются маркеры цитокиновых рецепторов.

MedUniver.com